【檢驗(yàn)原理】
伯氏疏螺旋體(BB)熒光探針?lè)≒CR試劑盒采用熒光探針檢測(cè)目標(biāo)序列擴(kuò)增程度的PCR技術(shù)。其方法是通過(guò)引入帶有熒光標(biāo)記的探針?lè)肿?，在擴(kuò)增目標(biāo)序列的同時(shí)檢測(cè)其PCR產(chǎn)物的有效擴(kuò)增程度，從而確定是否有特定基因的存在。
【使用特點(diǎn)】
1. 精準(zhǔn)度高，可靠性高，可檢測(cè)到極低限度的目標(biāo)序列，檢測(cè)結(jié)果具有高度的精準(zhǔn)度，可比較準(zhǔn)確地判斷目標(biāo)基因是否存在。
2. 廣泛適用于基因定量、基因表達(dá)、突變檢測(cè)、病毒檢測(cè)等多種領(lǐng)域的研究和診斷。
3. 伯氏疏螺旋體(BB)熒光探針?lè)≒CR試劑盒檢測(cè)結(jié)果可視化，檢測(cè)結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)表現(xiàn)出來(lái)，當(dāng)目標(biāo)基因存在時(shí)，產(chǎn)物會(huì)呈現(xiàn)出熒光恒定，而無(wú)熒光信號(hào)則表示目標(biāo)基因不存在。
4. 采用的熒光探針選擇合理，能有效地減少PCR擴(kuò)增的假陽(yáng)性結(jié)果。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 7 次，有效期 12 個(gè)月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。
說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。
1.1 DNA 提取
1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液(固體標(biāo)本加入50μL 核酸提取液)， 100℃恒溫處理 10min，13,000 rpm 離心 5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒(離心柱提取法)，請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
2. 檢測(cè)方法的局限性
a. 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
b. 樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；
c. 陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；
d. 病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
e. 不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
f. 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果；
g. 本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。
1.1 結(jié)果判斷
陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線。
可疑：檢測(cè)通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴(kuò)增曲線者為陽(yáng)性，否則為陰性。
陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值且無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線。
3. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品：無(wú)明顯擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示；
陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
伯氏疏螺旋體(BB)熒光探針?lè)≒CR試劑盒?相關(guān)產(chǎn)品：
| 0321禽流感病毒H5亞型(AIV-H5)試劑盒 |
| 0311禽流感病毒通用型(AIV-U)試劑盒(RT-PCR |
| 0211乙型流感病毒(IBV)試劑盒(RT-PCR熒光探針?lè)?/td> |
| 0161甲型流感病毒H1-2009(IAV-H1-2009) |
| 0151甲型流感病毒N1亞型(IAV-N1)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-P48T |
| 0131甲型流感病毒H3亞型(IAV-H3)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-P48T |
| 0121甲型流感病毒H1亞型(IAV-H1)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-P48T |
| 0113豬流感(SIV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR熒光探針?lè)?48T |
| 0111甲型流感病毒(IAV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR熒光探針?lè)?8T |
| 0612委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒(VEE)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法) 48T |
| 0512馬傳染性貧血病病毒(EIAV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法) 48T |
